概要：32.L6、L8[2012•福建卷] [生物—现代生物科技专题]肺细胞中的let­7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let­7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。图1图2请回答：(1)进行过程①时，需用____________酶切开载体以插入let­7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let­7基因转录，该部位称为________。(2)进行过程②时，需用______酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。(3)研究发现，let­7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取______进行分子杂交，以直接检测let­7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中______(RAS mRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。32.(1)限制性核酸内切(或限制)启动子(2)胰蛋白(3)RNARAS蛋白[解析] 本题主要考查有关基因工程和细胞工程中的知识。(

32.L6、L8[2012•福建卷] [生物—现代生物科技专题]

肺细胞中的let­7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let­7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

图1

图2

请回答：

(1)进行过程①时，需用____________酶切开载体以插入let­7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let­7基因转录，该部位称为________。

(2)进行过程②时，需用______酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

(3)研究发现，let­7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取______进行分子杂交，以直接检测let­7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中______(RAS mRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。

32.(1)限制性核酸内切(或限制)　启动子

(2)胰蛋白　(3)RNA　RAS蛋白

[解析] 本题主要考查有关基因工程和细胞工程中的知识。(1)过程①表示基因表达载体的构建，在该过程中需要用限制酶对载体进行切割以便于目的基因的插入;启动子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶结合和识别的位点，RNA聚合酶结合到该位点，可驱动转录过程。(2)过程②表示动物细胞培养，培养过程中出现接触性抑制后可以用胰蛋白酶处理，使之分散成单个的细胞，之后分装到其他培养瓶里面进行传代培养。(3)判断目的基因是否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术来进行检测，从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交。根据题中信息“肺组织细胞中的let­7基因表达减弱，癌基因RAS表达就增强，引发肺癌”，导入let­7基因后，肺癌细胞受到抑制，说明RAS基因表达减弱，导致细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞受抑制。

31.G3、L6 [2012•安徽卷] 甲型血友病是由X染色体上的隐性基因导致的遗传病(H对h为显性)。图4中两个家系都有血友病发病史，Ⅲ2和Ⅲ3婚后生下一个性染色体组成是XXY的非血友病儿子(Ⅳ2)，家系中的其他成员性染色体组成均正常。

图4

(1)根据图4，________(填“能”或“不能”)确定Ⅳ2两条X染色体的来源;Ⅲ4与正常女子结婚，推断其女儿患血友病的概率是________。

(2)两个家系的甲型血友病均由凝血因子Ⅷ(简称F8，即抗血友病球蛋白)基因碱基对缺失所致。为探明Ⅳ2的病因，对家系的第Ⅲ、Ⅳ代成员F8基因的特异片段进行了PCR扩增，其产物电泳结果如图5所示，结合图4，推断Ⅲ3的基因型是________。请用图解和必要的文字说明Ⅳ2非血友病XXY的形成原因。

图5

(3)现Ⅲ3再次怀孕，产前诊断显示胎儿(Ⅳ3)细胞的染色体为46，XY;F8基因的PCR检测结果如图5所示。由此建议Ⅲ3________。

(4)补给F8可治疗甲型血友病。采用凝胶色谱法从血液中分离纯化F8时，在凝胶装填色谱柱后，需要用缓冲液处理较长时间，其目的是________;若F8比某些杂蛋白先收集到，说明F8的相对分子质量较这些杂蛋白________。

(5)利用转基因猪乳腺生物反应器可生产F8。要使乳腺细胞合成F8，构建表达载体时，必须将F8基因cDNA与猪乳腺蛋白基因的________等调控组件重组在一起。F8基因cDNA可通过克隆筛选获得，该cDNA比染色体上的F8基因短，原因是该cDNA没有________。

(6)为获得更多的转基因母猪，可以采用体细胞克隆技术，将纯合转基因母猪的体细胞核注入____________，构建重组胚胎进行繁殖。

31.(1)不能　0

(2)XHXh　图解如下

在Ⅲ3形成卵细胞过程中的减数第二次分裂后期，带有基因H的姐妹染色单体移向细胞同一极，形成XHXH卵细胞。XHXH卵细胞与正常精子结合形成XHXHY受精卵。

(3)终止妊娠

(4)洗涤平衡凝胶，并使凝胶装填紧密　大

(5)启动子　内含子

(6)去核的卵母细胞

[解析] 本题考查人类遗传病、减数分裂、蛋白质的提取等相关知识，考查学生的分析与综合能力。(1)Ⅳ2的性染色体组成是XXY，这两条X染色体，有可能是精子形成过程中同源染色体没有分开，形成了一个含有

XY染色体的配子，也可能是减数第一次分裂后期同源染色体未分离，也可能是减数第二次分裂后期染色单体分开后未移向两极，形成了含有两条X染色体的配子，故无法判断两条X染色体的来源。Ⅲ4的基因型是XHY，肯定将XH传给女儿，女儿不可能患血友病。(2)Ⅲ2是血友病患者，含有Xh，图中位于下部的条带均应含有Xh基因，上面的条带应含XH基因，则Ⅲ3的基因型是XHXh，Ⅳ2是非血友病患者，且从条带的位置可以看出其基因型是XHXHY，故不可能在减数第一次分裂时出现异常产生含有XHXh的配子，精子的形成过程正常，图解如答案所示。(3)Ⅲ3再次怀孕的孩子是男孩，从条带结果看含有基因Xh，为血友病患者，应当终止妊娠。(4)凝胶装填色谱柱后用缓冲液处理较长时间，目的是洗涤平衡凝胶，并使凝胶装填紧密。(5)表达载体上的调控组件包括启动子和终止子，基因必须含有启动子才能开始复制。真核细胞基因的编码区含有外显子和内含子，转录出成熟的mRNA时经过了剪切，mRNA上不含有内含子，cDNA是mRNA通过反转录得到的，也就不含内含子。(6)动物细胞核移植的受体细胞是去核的卵母细胞。

L7 植物细胞工程与植物的组织培养技术

34.L5L7[2012•山东卷] [生物—生物技术实践]

辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如图所示。

(1)图中①和②分别表示辣椒组织培养中细胞的________和________过程。

(2)图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是__________。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值________(填“高”或“低”)时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是________________________________________________________________________。

(3)图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是__________。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是________和纤维素酶。

(4)提取辣椒素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是______________。

34.(1)脱分化(或去分化)　再分化

(2)琼脂　低　高压蒸汽灭菌法

(3)70%　果胶酶　防止有机溶剂挥发

[解析] 本题主要考查植物组织培养的过程和植物成分的提取中的注意事项。由外植体得到愈伤组织的过程是脱分化过程，由愈伤组织得到根、芽的过程是再分化过程;培养基中的植物激素能够促进植物的生长和发育，当生长素/细胞分裂素的比值低时有利于芽的分化，当比值高时有利于根的分化;对培养基进行彻底灭菌常用高压蒸汽灭菌法;外植体的消毒所需酒精的体积分数是70%; 细胞间的主要成分纤维素和果胶，分离细胞要用到纤维素酶和果胶酶;用冷凝回流装置可以防止有机溶剂随蒸汽挥发。

39.L7[2012•课标全国卷] [生物—选修1生物技术实践]

为了探究6—BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响，某研究小组在MS培养基中加入6—BA和IAA，配制成四种培养基(见下表)，灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体，在适宜条件下培养一段时间后，统计再生丛芽外植体的比率(m)，以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)，结果如下表。

培养基编号

1

2

3

4

浓度/mg•L-1

6—BA IAA

0.5

0

0.1

0.2

0.5

m/% n/个

76.7 3.1

77.4 6.1

66.7 5.3

60.0 5.0

回答下列问题：

(1)按照植物的需求量，培养基中无机盐的元素可分为________和________两类。上述培养基中，6—BA属于________类生长调节剂。

(2)在该实验中，自变量是________，因变量是______________________________________，自变量的取值范围是________。

(3)从实验结果可知，诱导丛芽总数最少的培养基是________号培养基。

(4)为了诱导该菊花试管苗生根，培养基中一般不加入________(填“6—BA”或“IAA”)。

39.(1)大量元素　微量元素　细胞分裂素

(2) IAA的浓度　再生丛芽外植体的比率(m)和再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)　0～0.5 mg•L-1　(3)1　(4)6-BA

[解析] 本题考查IAA和 6-BA对植物组织培养的影响，考查学生的理解能力。(1)根据植物的需求量，元素可以分为大量元素和微量元素，6-BA属于细胞分裂素类的生长调节剂。(2)根据实验目的和实验中的步骤中的数据可知，6-BA浓度不变，IAA浓度范围是0～0.5 mg•L-1，由小到大变化是自变量。根据题干信息可知再生丛芽外植体的比率(m)和再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)是因变量。(3)再生丛芽外植体的比率(m)乘以再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n)即为丛芽总数，所以最少的是1号培养基。(4)诱导试管苗生根需要生长素用量和细胞分裂素用量的比值比较高，所以培养基中不需要加6-BA。

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