概要： 三、DNA的粗提取和鉴定实验中应注意的问题1.盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，细胞内DNA的含量比较少，如果被玻璃窖吸附却一部分，提取的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程中DNA的损失。2.获取较纯净的DNA的关键步骤。⑴充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合后，必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使鸡血细胞加速破裂，并释放出DNA。⑵沉淀DNA时必须用冷酒精。实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精，并在冰箱中至少存放24h。⑶正确搅拌含有悬浮物的溶液。实验步骤3、5、7都需要用玻璃棒搅拌。在进行步骤3、5时，玻璃棒不要直接接触烧杯底部，而且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时，要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间，用手缓慢转动5min～10min。3.本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法。如果在没有二苯胺的情况下也可以用以下几种方法。⑴配制染色剂。用蒸馏水配制0.05%的溴化乙锭(EB)溶液。⑵将玻璃棒上缠绕的

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三、DNA的粗提取和鉴定实验中应注意的问题

1.盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，细胞内DNA的含量比较少，如果被玻璃窖吸附却一部分，提取的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程中DNA的损失。

2.获取较纯净的DNA的关键步骤。

⑴充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合后，必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使鸡血细胞加速破裂，并释放出DNA。

⑵沉淀DNA时必须用冷酒精。实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精，并在冰箱中至少存放24h。

⑶正确搅拌含有悬浮物的溶液。实验步骤3、5、7都需要用玻璃棒搅拌。在进行步骤3、5时，玻璃棒不要直接接触烧杯底部，而且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时，要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间，用手缓慢转动5min～10min。

3.本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法。如果在没有二苯胺的情况下也可以用以下几种方法。

⑴配制染色剂。用蒸馏水配制0.05%的溴化乙锭(EB)溶液。

⑵将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴1滴EB溶液染色。

⑶将蜡纸放在紫外灯(260nm)下照射(暗室中)，可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260nm处)。

4.典例解析

1.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验原理中，说法错误的是

A.DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变

B.利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNA

C.DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂

D.DNA溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应

解析：该实验依据的原理是A、B、D，DNA不溶于酒精(属有机溶剂)，C说法错误。

答案：C

2.下列关于实验操作的说法中，有误的是( )

A.该实验中有两次加入蒸馏水，均是为了析出DNA

B.该实验学生操作中多次用到搅拌，除最后一步未强调方向外，其余均要求单向搅拌

C.该实验中有3次过滤，过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物有关

D.实验三次加入NaCl溶液，无论浓度是2mol/L，还是0.015mol/L，均是为了溶解DNA

解析：对照比较表可知，除A说法有误外，其余各项均正确。两次加蒸馏水，第一次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质(DNA)，第二次是为了降低NaCl溶液的浓度从而析出DNA。

答案：A

3.填写本实验操作过程中所用试剂。

⑴提取鸡血细胞中核物质： ;

⑵溶解核内DNA： ;

⑶析出溶液中的DNA： ;

⑷DNA粘稠物的再溶解： ;

⑸提取杂质较少的DNA白色乳状丝状物： ;

⑹鉴定DNA是否存在可用试剂： 。

解析： ⑹鉴定DNA是否存在常用：二苯胺试剂沸水浴为蓝色反应;也可选用甲基绿试剂，其颜色反应为蓝绿色。(其它略)

答案：⑴蒸馏水 ⑵2mol/L NaCl溶液 ⑶蒸馏水 ⑷2mol/L NaCl溶液 ⑸冷却的体积分数为95%的酒精 ⑹二苯胺试剂或甲基绿试剂

 

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