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DNA的粗提取与鉴定实验分类比较

[01-02 18:41:13]   来源:http://www.51jxk.com  高三生物   阅读:8609

概要: 三、DNA的粗提取和鉴定实验中应注意的问题1.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,细胞内DNA的含量比较少,如果被玻璃窖吸附却一部分,提取的DNA就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失。2.获取较纯净的DNA的关键步骤。⑴充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。⑵沉淀DNA时必须用冷酒精。实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精,并在冰箱中至少存放24h。⑶正确搅拌含有悬浮物的溶液。实验步骤3、5、7都需要用玻璃棒搅拌。在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直接接触烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动5min~10min。3.本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法。如果在没有二苯胺的情况下也可以用以下几种方法。⑴配制染色剂。用蒸馏水配制0.05%的溴化乙锭(EB)溶液。⑵将玻璃棒上缠绕的

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三、DNA的粗提取和鉴定实验中应注意的问题

1.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,细胞内DNA的含量比较少,如果被玻璃窖吸附却一部分,提取的DNA就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失。

2.获取较纯净的DNA的关键步骤。

⑴充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。

⑵沉淀DNA时必须用冷酒精。实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精,并在冰箱中至少存放24h。

⑶正确搅拌含有悬浮物的溶液。实验步骤3、5、7都需要用玻璃棒搅拌。在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直接接触烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动5min~10min。

3.本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法。如果在没有二苯胺的情况下也可以用以下几种方法。

⑴配制染色剂。用蒸馏水配制0.05%的溴化乙锭(EB)溶液。

⑵将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上,再滴1滴EB溶液染色。

⑶将蜡纸放在紫外灯(260nm)下照射(暗室中),可见橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260nm处)。

4.典例解析

1.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验原理中,说法错误的是

A.DNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变

B.利用DNA不溶于酒精的性质,可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNA

C.DNA是大分子有机物,不溶于水而溶于某些有机溶剂

D.DNA溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应

解析:该实验依据的原理是A、B、D,DNA不溶于酒精(属有机溶剂),C说法错误。

答案:C

2.下列关于实验操作的说法中,有误的是( )

A.该实验中有两次加入蒸馏水,均是为了析出DNA

B.该实验学生操作中多次用到搅拌,除最后一步未强调方向外,其余均要求单向搅拌

C.该实验中有3次过滤,过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物有关

D.实验三次加入NaCl溶液,无论浓度是2mol/L,还是0.015mol/L,均是为了溶解DNA

解析:对照比较表可知,除A说法有误外,其余各项均正确。两次加蒸馏水,第一次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质(DNA),第二次是为了降低NaCl溶液的浓度从而析出DNA。

答案:A

3.填写本实验操作过程中所用试剂。

⑴提取鸡血细胞中核物质: ;

⑵溶解核内DNA: ;

⑶析出溶液中的DNA: ;

⑷DNA粘稠物的再溶解: ;

⑸提取杂质较少的DNA白色乳状丝状物: ;

⑹鉴定DNA是否存在可用试剂: 。

解析: ⑹鉴定DNA是否存在常用:二苯胺试剂沸水浴为蓝色反应;也可选用甲基绿试剂,其颜色反应为蓝绿色。(其它略)

答案:⑴蒸馏水 ⑵2mol/L NaCl溶液 ⑶蒸馏水 ⑷2mol/L NaCl溶液 ⑸冷却的体积分数为95%的酒精 ⑹二苯胺试剂或甲基绿试剂

 

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